单个B细胞制备CRP单克隆抗体及其ELISA检测体系的初步建立

• 作者: 刘尧 刘谦 山云 林骏 王晓炜 王洪涛
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 单个B细胞 CRP 单克隆抗体 真核表达系统 ELISA
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 69-73
• 页数: 5页
• 分类号: R446.6
• 字数: 3834字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2019.01.014

摘要

目的:用单个B细胞抗体制备技术结合Exip293真核表达系统制备hs-CRP单克隆抗体.方法:用重组CRP蛋白免疫小鼠,荧光标记探针和流式分选技术分离出表达CRP单克隆抗体的单个B细胞,通过PCR方法扩增出编码CRP单克隆抗体蛋白的轻重链核酸序列并构建重组质粒,质粒转染到Expi 293细胞中制备出单克隆抗体蛋白.结果:用间接ELISA法筛选出两个具有良好特异性的单克隆抗体20#,22#,将这两个抗体配对并建立ELISA双抗体夹心检测方法,CRP浓度在15～250 ng/ml范围内有较好的检测线性(y=0.003x-0.0358,R2=0.9974),精密度分析的批内变异系数CV为6.7％ ～9.37％,批间变异系数为8.52％ ～9.10％,平均回收率为98％,与临床血清检测值具有良好的相关性,达到CRP检测要求.结论:本研究所用的单个B细胞分离分选方法结合Expi 293真核表达系统在制备单克隆抗体方面具有省时、高效、特异性好、灵敏度高的特点,具有很好的应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘尧	深圳市药品检验研究院深圳市医疗器械检测中心	8	27	3.0	5.0
2	王晓炜	深圳市药品检验研究院深圳市医疗器械检测中心	37	112	7.0	8.0
3	林骏	深圳市药品检验研究院深圳市医疗器械检测中心	4	3	1.0	1.0
4	山云		1	3	1.0	1.0
5	刘谦		1	3	1.0	1.0
6	王洪涛	深圳市药品检验研究院深圳市医疗器械检测中心	1	3	1.0	1.0