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靶向胶质瘤的敲除程序死亡受体-1基因表皮生长因子突变受体Ⅲ嵌合抗原受体T细胞的构建和功能鉴定
靶向胶质瘤的敲除程序死亡受体-1基因表皮生长因子突变受体Ⅲ嵌合抗原受体T细胞的构建和功能鉴定
作者:
刁波
刘莹
王刚
袁紫林
闫德祺
陈力
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
嵌合抗原受体T细胞
胶质瘤
程序性死亡受体1
表皮生长因子突变受体Ⅲ
摘要:
目的 构建敲除程序死亡受体-1(PD-1)基因的靶向表皮生长因子突变受体Ⅲ(EGFRvⅢ)阳性胶质瘤细胞的嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞,评估其在体外和体内对EGFRvⅢ阳性胶质瘤细胞的杀伤作用.方法 运用电转染技术构建靶向EGFRvⅢ抗原的CAR-T细胞,并用基因打靶技术(CRISPR/Cas9)敲除其PD-1基因,获得PD-1ko EGFRvⅢCAR-T细胞;流式细胞术、聚合酶链反应(PCR)和酶切法验证PD-1 ko EGFRvⅢCAR-T细胞是否构建成功;流式细胞术及乳酸脱氢酶细胞毒性试剂盒检测PD-1ko EGFRvⅢCAR-T细胞对胶质瘤细胞的杀伤作用.选取15只6~8周龄雌性BALB/c-nude小鼠,构建肿瘤模型,随机分为PD-1ko EGFRvⅢCAR-T细胞组、T细胞组、磷酸盐缓冲液(PBS)组.各组在第28、32和36天分别注入100μl 5×106个PD-1ko CAR-T细胞、T细胞、100 μl PBS.应用SPSS 18.0软件进行统计,计量资料采用均数±标准差表示,两组间均数比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 PCR及酶切实验显示PD-1ko EGFRvⅢCAR-T细胞PD-1出现了不同条带,验证基因敲除成功.体外实验中,PD-1ko EGFRvⅢCAR-T细胞分泌的细胞因子浓度[白细胞介素(IL)-2:(242.08±19.08) ng/L,干扰素(IFN)-γ:(8 374.8 ±265.82) ng/L]均显著高于T细胞组[IL-2:(153.73±13.23) ng/L,IFN-γ:(2 118.96±29.62) ng/L],差异有统计学意义(IL-2:t=6.589,P< 0.05;IFN-γ:t=33.076,P< 0.05).细胞毒性实验结果显示PD-1 koEGFRvⅢCAR-T组对胶质瘤细胞杀伤作用显著高于T细胞组及PBS组,且效靶比越高杀伤作用越强.移植瘤裸鼠注射细胞后,PD-1ko EGFRvⅢCAR-T组瘤体体积为(1.06±0.26) cm3,显著小于T细胞的(5.14±1.57) cm3和PBS对照组组瘤体体积为(5.04 ±0.61) cm3,3组比较差异均有统计学意义(F=22.290,P<0.05).结论 PD-1 ko EGFRvⅢCAR-T细胞具有良好的抑瘤效果.
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内容分析
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文献信息
篇名
靶向胶质瘤的敲除程序死亡受体-1基因表皮生长因子突变受体Ⅲ嵌合抗原受体T细胞的构建和功能鉴定
来源期刊
中华实验外科杂志
学科
关键词
嵌合抗原受体T细胞
胶质瘤
程序性死亡受体1
表皮生长因子突变受体Ⅲ
年,卷(期)
2019,(8)
所属期刊栏目
神经外科
研究方向
页码范围
1358-1361
页数
4页
分类号
字数
3481字
语种
中文
DOI
10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2019.08.003
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
王刚
中国人民解放军中部战区总医院医学实验科
133
875
16.0
25.0
2
刁波
中国人民解放军中部战区总医院医学实验科
12
27
3.0
4.0
3
闫德祺
黄淮学院林业科学研究所
18
80
5.0
8.0
4
陈力
中国人民解放军中部战区总医院医学实验科
48
202
8.0
12.0
5
刘莹
中国人民解放军中部战区总医院检验科
56
225
7.0
14.0
6
袁紫林
中国人民解放军中部战区总医院医学实验科
6
5
2.0
2.0
传播情况
被引次数趋势
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(/年)
引文网络
引文网络
二级参考文献
(0)
共引文献
(0)
参考文献
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同被引文献
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1990(1)
参考文献(1)
二级参考文献(0)
2008(1)
参考文献(1)
二级参考文献(0)
2011(1)
参考文献(1)
二级参考文献(0)
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参考文献(1)
二级参考文献(0)
2014(1)
参考文献(1)
二级参考文献(0)
2015(2)
参考文献(2)
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2016(1)
参考文献(1)
二级参考文献(0)
2019(0)
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二级参考文献(0)
引证文献(0)
二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
嵌合抗原受体T细胞
胶质瘤
程序性死亡受体1
表皮生长因子突变受体Ⅲ
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中华实验外科杂志
主办单位:
中华医学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1001-9030
CN:
42-1213/R
开本:
大16开
出版地:
武汉市东湖路165号
邮发代号:
38-85
创刊时间:
1984
语种:
chi
出版文献量(篇)
17168
总下载数(次)
19
总被引数(次)
69898
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