摘要:
目的 培育TH-GFP转基因斑马鱼幼鱼,建立转基因斑马鱼幼鱼甲基苯丙胺依赖模型,观察钩藤叶水提物对模型幼鱼的影响.方法 收集健康斑马鱼受精卵,向卵黄囊中注射TH-GFP质粒,构建TH-GFP转基因斑马鱼幼鱼.取转基因斑马鱼幼鱼,随机放入含有60,6,0.6,0.06 mg·L-1甲基苯丙胺溶液中,3 d后,将斑马鱼幼鱼固定,然后放入液态的低熔点琼脂糖中,用荧光体视显微镜观察其头部的荧光变化.取转基因斑马鱼幼鱼,随机分为空白组、对照组(甲基苯丙胺0.6 mg·L-1)、高剂量实验组(钩藤叶水提物330 mg·mL-1)和低剂量实验组(钩藤叶水提物33 mg·mL-1).除空白组外,将各组斑马鱼幼鱼放入0.6 mg·L-1的甲基苯丙胺溶液中自由游动.48 h后,将高、低剂量实验组斑马鱼幼鱼放入相应浓度的钩藤叶水提物中,甲基苯丙胺模型组放入鱼用生理盐水中,自由游动.24 h后,将各组斑马鱼幼鱼固定,放入液态的低熔点琼脂糖中,用激光扫描共聚焦显微镜观察其荧光变化.结果 与空白组相比,显微注射TH-GFP质粒后的斑马鱼幼鱼头部出现明显荧光.在绿色荧光下,与空白组斑马鱼幼鱼相比,对照组斑马鱼幼鱼头部荧光变化不明显,其余各组斑马鱼幼鱼头部荧光变化明显.将各组斑马鱼幼鱼放入相应浓度的钩藤叶水提物中24 h后,在共聚焦显微镜下观察,与空白组相比,对照组斑马鱼幼鱼头部荧光明显增强.与对照组相比,钩藤叶水提物组斑马鱼幼鱼头部荧光有所减弱.结论 TH-GFP转基因斑马鱼可以用于观察斑马鱼甲基苯丙胺依赖变化.0.6 mg·L-1的甲基苯丙胺溶液可以使TH-GFP转基因斑马鱼头部荧光发生明显增强,而钩藤叶水提物可以降低这种荧光的改变.