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人AFP启动子操控的跨膜型抗CD3单链抗体构建及其在AFP阳性肝癌细胞中特异性表达
人AFP启动子操控的跨膜型抗CD3单链抗体构建及其在AFP阳性肝癌细胞中特异性表达
作者:
卢杨
张晴
张砚君
林芳珍
熊冬生
熊梦裳
祁麟
范冬梅
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
肝癌
肿瘤免疫治疗
抗CD3单链抗体
人甲胎蛋白启动子
摘要:
目的 设计肝癌特异性人甲胎蛋白启动子(hAFPp)操控的跨膜型抗CD3单链抗体(antiCD3scfv),使其仅在AFP阳性(AFP+)肝癌细胞中特异性表达.方法 利用分子克隆技术构建pAd-hAFPp-CD3scfv腺病毒载体、pAd-hAFPp-antiCD3scfv穿梭质粒载体,经测序验证其基因序列的正确性.取AFP+人肝癌细胞HepG2、Huh-7及AFP阴性(AFP-)正常人肝细胞HL-7702、人乳腺癌细胞MCF-7,利用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定hAFPp的肝癌细胞转录特异性;通过Western blotting、免疫荧光、流式分析检测antiCD3scfv蛋白在细胞的表达、定位及表达效率.结果 构建的pAd-hAFPp-CD3scfv腺病毒载体、pAd-hAFPp-antiCD3scfv穿梭质粒载体,经测序后基因序列正确.hAFPp在AFP+的HepG2、Huh-7细胞中转录活性分别为160.86% ±26.24%、80.08% ±12.64%,而在AFP-细胞中转录活性均<7%(P均<0.05).在AdCD3scfv感染的细胞中,仅HepG2、Huh-7细胞中检测到antiCD3scfv蛋白表达(36.7 kD),且表达于细胞膜表面,细胞中GFP+antiCD3scfv+细胞群比例>90%,而HL-7702、MCF-7均无条带出现.结论 携带antiCD3scfv蛋白基因的腺病毒感染周围细胞后,hAFPp调控antiCD3scfv在肝癌细胞的细胞膜特异性表达,进而可能实现antiCD3scfv分子直接介导免疫杀伤的抗肿瘤效果.
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篇名
人AFP启动子操控的跨膜型抗CD3单链抗体构建及其在AFP阳性肝癌细胞中特异性表达
来源期刊
山东医药
学科
医学
关键词
肝癌
肿瘤免疫治疗
抗CD3单链抗体
人甲胎蛋白启动子
年,卷(期)
2019,(29)
所属期刊栏目
论著
研究方向
页码范围
1-4,封3
页数
5页
分类号
R318
字数
4076字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1002-266X.2019.29.001
五维指标
传播情况
被引次数趋势
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引文网络
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抗CD3单链抗体
人甲胎蛋白启动子
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
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期刊影响力
山东医药
主办单位:
山东卫生报刊社
出版周期:
周刊
ISSN:
1002-266X
CN:
37-1156/R
开本:
大16开
出版地:
济南市燕东新路6号
邮发代号:
24-8
创刊时间:
1957
语种:
chi
出版文献量(篇)
55362
总下载数(次)
42
总被引数(次)
199298
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