AFP启动子介导胸苷激酶表达载体的构建及其特异性表达

• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: AFP启动子 HepG2细胞 靶向表达 单纯疱疹病毒-胸腺嘧啶激酶1
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 技术研究
• 页码范围: 591-594
• 页数: 4页
• 分类号: R735.7
• 字数: 3036字
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建AFP启动子介导HSV-TK基因表达载体,并对其在肝癌细胞中特异性表达进行分析.[方法]采用PCR法扩增人AFP基因启动子.回收纯化后克隆入pBluescript Ⅱ KDR-TK相同克隆位点,切取AFP-TK片段,然后通过酶联反应插入到pEGFP-C1中,构建成pEGFP-C1-AFP-TK.对获得的片段进行鉴定、细胞靶向和外源基因表达的鉴定.[结果]序列分析表明,该启动子含300 bp核苷酸,与已报道的序列比较,100%相符.限制性酶切分析,重组质粒pEGFP-C1-AFP-TK已经克隆AFP启动子.RT-PCR及Western blotting分析pEGFP-C1-AFP-TK转染后的HepG2细胞后,表明TK基因在mRNA水平上能有效的表达,裂解后的HepG2细胞膜蛋白中有相对分子质量约61～83 ku大小的特异性条带.[结论]人肝细胞癌(HepG2)靶向性质粒pEGFP-C1-AFP-TK构建成功.