摘要:
背景:大量体外细胞实验和动物实验表明,白藜芦醇不仅具有抗氧化应激、抗炎、抗病毒、抗肿瘤和延缓衰老等生理活性,还具有骨保护作用.目的:观察白藜芦醇对钛磨损颗粒诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞氧化应激水平与炎症反应的调节作用.方法:以不同浓度(0,10,20,40,80,160μmol/L)的白藜芦醇溶液干预小鼠RAW264.7巨噬细胞,培养24 h后,WST-1法检测细胞存活率,选择对细胞活性影响较小的浓度进行后续实验.将小鼠RAW264.7巨噬细胞分5组干预:对照组常规培养;钛颗粒组加入钛颗粒刺激细胞12 h;低、中、高浓度白藜芦醇组分别加入10,20,40μmol/L的白藜芦醇溶液预刺激细胞4 h,随后各组加入钛颗粒刺激细胞12 h.钛颗粒刺激12 h后,收集细胞与细胞培养上清,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧水平,荧光定量PCR检测抗氧化应激相关酶(铜/锌超氧化物歧化酶、锰超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶、过氧化氢酶)和肿瘤坏死因子 αmRNA水平,利用ELISA检测肿瘤坏死因子 α 质量浓度.结果与结论:①10,20,40μmol/L白藜芦醇对小鼠RAW264.7巨噬细胞活性无明显抑制作用,故选择此3组浓度进行后续实验;②与对照组比较,钛颗粒组细胞内活性氧水平升高(P<0.05);与钛颗粒组比较,白藜芦醇呈浓度依赖性降低细胞内活性氧水平(P<0.05);③与对照组比较,钛颗粒组锰超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶mRNA表达下降(P<0.05),谷胱甘肽还原酶、过氧化氢酶mRNA表达升高(P<0.05);与钛颗粒组比较,中、高浓度白藜芦醇组锰超氧化物歧化酶、铜/锌超氧化物歧化酶mRNA表达升高(P<0.05),低、中、高浓度白藜芦醇组过氧化氢酶mRNA表达升高(P<0.05);④与对照组比较,钛颗粒组肿瘤坏死因子 αmRNA水平与肿瘤坏死因子 α 的分泌均升高(P<0.05);与钛颗粒组比较,低、中、高浓度白藜芦醇呈浓度依赖性降低肿瘤坏死因子 αmRNA水平与肿瘤坏死因子 α 的分泌(P<0.05);⑤结果表明,白藜芦醇能够有效提高金属钛颗粒刺激后巨噬细胞内抗氧化应激相关酶的转录,降低细胞内氧化应激水平,减少炎症因子肿瘤坏死因子 α 的释放.