新城疫病毒HN蛋白的酵母表达及其活性鉴定

• 作者: 丁培阳 周稳 张改平 李旭锋 柴永笑 王垚 金前跃 陈晓
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 新城疫病毒 HN蛋白 毕赤酵母 蛋白质纯化 蛋白质活性
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 145-150
• 页数: 6页
• 分类号: S855
• 字数: 4415字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.03.019

摘要

为了制备新城疫病毒(NDV)HN蛋白并研究其免疫原性,将优化的HN基因胞外区插入毕赤酵母表达载体pPICZαA中,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-HN,并将其电转入毕赤酵母X-33感受态中,经PCR鉴定得到阳性转化子,甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE和Western blot鉴定筛选出目的蛋白表达菌株;通过对诱导剂含量、诱导时间、培养基初始pH值和诱导温度进行优化,研究最佳表达条件;采用镍柱亲和层析对目的蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA对目的蛋白进行鉴定;利用去糖基化酶PNGase F对目的蛋白进行处理,验证其糖基化修饰程度.结果显示,HN重组蛋白在毕赤酵母中成功表达,且在28℃ 条件下,培养基初始pH值为7.0,用0.5％甲醇诱导5 d,蛋白质表达量最高;通过镍柱亲和层析可获得纯度高于90％的重组蛋白;间接ELISA结果表明,重组蛋白活性良好;去糖基化试验验证了重组蛋白存在糖基化修饰.综上,利用毕赤酵母X-33成功表达了HN蛋白,且纯化产物纯度较高、活性良好,具有糖基化修饰.