靶向FAP的第4代CAR-T细胞的构建及其性能研究

• 作者: 冯都都 李帆帆 陈辉 高基民
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 嵌合抗原受体T细胞 成纤维细胞活化蛋白 白细胞介素-7 趋化因子CCL19
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 372-381
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn112309-20200414-00198

摘要

目的 构建靶向肿瘤间质癌相关成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)的第2代和第4代CAR-T细胞,并比较两者在体内外的性能差异.方法 ELISA检测CAR-T细胞的细胞因子分泌情况;手工计数检测其增殖存活能力;Transwell迁移试验检测其趋化性能;流式细胞术检测其亚型分布;荧光素酶生物发光法检测其杀伤效率;小鼠肺癌转移模型评估其安全性和有效性.结果 第2代h4BBz CAR-T细胞的CAR表达率为(74.280±4.384)％,第4代h4BBz-7.19CAR-T为(67.220±4.013)％;h4BBz-7.19 CAR-T细胞能够分泌IL-7和CCL19,使其在体外的增殖能力和趋化能力较h4BBz CAR-T细胞强,存活能力相当.在亚型分布中,两种CAR表达率在CD4+T细胞群和CD8+T细胞群中均无显著性差异,但h4BBz-7.19 CAR-T细胞中的Naive和T记忆干细胞(Tmemory stem cell,TSCM)亚群在CD+T细胞群或CD8+T细胞群中所占比例均较h4BBz CAR-T细胞高.在杀伤试验中,h4BBz-7.19 CAR-T细胞在低效靶比时显示出较h4BBz CAR-T细胞更强的杀伤效率(效靶比为1∶1、2∶1、5∶1、10∶1、20∶1时的P值分别为:P1∶1=0.004、P2∶1=0.000 6、P5∶1＜0.000 1、P10∶1=0.022、P20∶1=0.116),且其T细胞表面免疫抑制分子PD-1的表达水平较h4BBzCAR-T细胞低.在NOG小鼠肺癌转移模型中,h4BBz-7.19 CAR-T组小鼠的肿瘤生长较对照组缓慢,其生存时间更长(P=0.003 8),且对小鼠体重和脏器无影响.结论 本研究构建的靶向FAP的第4代CAR-T细胞通过分泌IL-7和CCL19增强增殖存活、渗透趋化和特异性杀伤活性,并可在一定程度上通过改善肿瘤免疫抑制性微环境以延缓肿瘤生长、延长生存时间,从而为其在临床上的应用提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈辉	温州医科大学检验医学院生命科学学院	19	47	4.0	6.0
2	高基民	温州医科大学检验医学院生命科学学院	32	23	2.0	4.0
4	李帆帆	温州医科大学检验医学院生命科学学院	3	0	0.0	0.0
8	冯都都	温州医科大学检验医学院生命科学学院	1	0	0.0	0.0