靶向肝癌的GPC3-CAR-T细胞的构建与功能鉴定

• 作者: 吴斯玮 安天琛 徐祥 敖罗权 敖翔 李战 胡雪停 邢伟 郭韡
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 嵌合抗原受体T细胞 免疫治疗 肝癌
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 748-755
• 页数: 8页
• 分类号: R735.7|R730.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385x.2017.07.009

摘要

目的:构建靶向GPC3阳性肝癌细胞的嵌合抗原受体修饰T细胞[chimeric antigen receptor-modified T cell,CAR-T cell],并评估其对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤效能.方法:选择偏爱密码子技术改造基因序列,以增强CAR分子表达效率,设计靶向GPC3抗原的CAR分子基因并构建携带GPC3-CAR基因的慢病毒表达载体pCDH-GPC3-CAR,感染T细胞;采用Western blotting、流式细胞术、实时细胞监测和ELISA技术分别检测GPC3-CAR分子在CAR-T细胞的表达、慢病毒感染T细胞效率、GPC3-CAR-T细胞对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤活性和特异性.结果:双酶切pCDH-GPC3-CAR重组慢病毒质粒可见分子质量和GPC3-CAR分子一致的基因片段,成功构建pCDH-GPC3-CAR慢病毒质粒.约54.38％的GPC3-T细胞表达GPC3-CAR分子,称为GPC3-CAR-T细胞.GPC3-CAR-T细胞对GPC3阳性的肝癌细胞Huh-7比GPC3阴性的肝癌细胞SK-HEP-1具有更高效的杀伤能力[(78.96±4.76)％ vs (6.87±3.15)％,P＜0.01].与GPC3阳性Huh-7肝癌细胞共培养的肝癌GPC3-CAR-T细胞分泌IFN-γ水平比Mock组高效[(21 371.4±1 808.3) vs (152.8±12.5) pg/ml,P＜0.01],这可能是其高效杀伤肝癌细胞的机制之一.结论:靶向肝癌的GPC3-CAR-T细胞具有高效分泌IFN-γ细胞因子并特异高效杀伤GPC3阳性肝癌细胞的能力,为进一步推进GPC3-CAR-T临床前和临床研究奠定基础.