非核糖体肽合成酶腺苷化结构域在E.coli中的表达及底物特异性分析

• 作者: 于宏伟 刘欣 郭润芳 魏小雅
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 侧孢短芽孢杆菌 抗菌肽 非核糖体肽合成酶 腺苷化结构域 底物特异性
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 页码范围: 110-115,132
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2020.0016

摘要

侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)S62-9产生的抗菌肽(Brevibacillin,BBL)是一种非核糖体多肽,由非核糖体肽合成酶催化合成.本研究所用基因是从侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)S62-9质粒基因组中克隆的一个非核糖体肽合成酶的腺苷化结构域(Nonribosomal peptide synthetase adenylation,NRPS-A)基因,根据此NRPS-A基因构建了pET21b-N1、pET21b-B2、pET22b-N1、pET22b-N3四个重组表达载体.将以上重组表达载体分别转化E.coli BL21、E.coli Rosetta(DE3)和E.coli Origami B(DE3)受体细胞,并用1 mmol/L异丙基 β-d-硫代吡喃半乳糖吡喃糖苷(IPTG)在16°C 200 r/min下进行诱导,将诱导产物用SDS-PAGE检测分析.结果显示,4种重组载体在E.coli BL21中均无表达,在E.coli Rosetta(DE3)大量表达但均以包涵体形式存在,在E.coli Origami B(DE3)均表达,但只有pET22b-N3这一重组表达载体出现了可溶性融合蛋白.可溶性融合蛋白对赖氨酸有较高的腺苷化活性,表明该A结构域负责抗菌肽BBL中的赖氨酸的识别和上载.该研究结果不仅为其它NRPS-A域的可溶性表达提供了方法,同时为研究抗菌肽BBL的生物合成机制提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于宏伟	河北农业大学食品科技学院	73	542	13.0	20.0
2	郭润芳	河北农业大学食品科技学院	57	836	11.0	28.0
3	刘欣	河北农业大学食品科技学院	4	30	3.0	4.0
4	魏小雅	河北农业大学食品科技学院	1	0	0.0	0.0