大肠杆菌菌毛基因多重PCR检测方法的建立与初步应用

• 作者: 侯美佳 冯启峥 刘嘉利 孙思萌 师东方 石博
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大肠杆菌 菌毛基因 多重PCR 检测
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 诊断和检测技术
• 页码范围: 46-51
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61
• 字数: 4757字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201907013

摘要

为建立一种可以同时扩增大肠杆菌(E.coli)F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因保守序列的多重PCR检测方法,本研究设计合成5对分别针对F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的特异性引物,以具有相应菌毛基因的E.coli参考菌株DNA为模板,通过对多重PCR反应条件的优化,建立了检测F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的多重PCR方法.所建立的多重PCR方法能够特异性扩增F4、F5、F6、F41、F18菌毛基因的目的片段,大小分别为770 bp、533 bp、422 bp、643 bp和1 140 bp,该方法对沙门氏菌、猪丹毒杆菌、巴氏杆菌以及无菌毛基因的E.coli等参考菌株均无特异性扩增片段,检出F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的最低活菌浓度分别为5.3×105 cfu/mL、3.7×10 cfu/mL、3.1×105 cfu/mL、3.7×107 cfu/mL、6.9× 105 cfu/mL.用不同批次的引物和试剂进行3次多重PCR检测均能扩增出目的条带,表明建立的多重PCR方法有很好的批内和批间重复性.对90株大肠杆菌临床分离菌株菌毛基因进行检测,F4阳性率为3.33％,F5阳性率为2.22％,未检测到F6、F41和F18阳性菌株,其检测结果与常规单一PCR的检测结果一致.研究表明:建立的E.coli菌毛基因多重PCR分型方法具有很好的特异性、敏感性和重复性,可用于E.coli分离菌株菌毛基因型的快速鉴定,同时提高了检测效率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	师东方	东北农业大学动物医学学院	56	299	9.0	14.0
2	孙思萌	东北农业大学动物医学学院	2	0	0.0	0.0
3	侯美佳	东北农业大学动物医学学院	2	0	0.0	0.0
4	冯启峥	东北农业大学动物医学学院	2	0	0.0	0.0
5	石博	东北农业大学动物医学学院	1	0	0.0	0.0
6	刘嘉利	东北农业大学动物医学学院	1	0	0.0	0.0