大肠杆菌肠毒素基因多重PCR检测方法的建立

• 作者: 关玮琨 刘文鑫 唐杰 孟相秋 师东方 李丹丹 杜元策 袁超文 赵姝静
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 产肠毒素大肠杆菌 耐热肠毒素 不耐热肠毒素 多重PCR
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: R378.2
• 字数: 2880字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.01.002

摘要

目的 建立一种快速检测大肠杆菌耐热肠毒素(heat-stable enterotoxin,STa,STb)和不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ)基因的多重PCR方法.方法 参照文献合成四对可扩增产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素基因(estA、estB)和不耐热肠毒素基因(eltⅠ、elt-Ⅱ)的特异性引物,通过反应条件的优化,敏感性、特异性试验和临床样品检测,建立检测大肠杆菌肠毒素的多重PCR方法.结果 用所建立的多重PCR方法可特异性扩增出estA(229 bp)、estB(480 bp)、elt-Ⅰ (605 bp)和elt-Ⅱ(300 bp)基因片段,最低检出量分别为2.55×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL和2.47× 103 CFU/μL.从22株大肠杆菌分离株中检测到estA基因(2/22),elt-Ⅱ基因(3/22),未检测到estB和elt-Ⅰ基因,检测结果与常规PCR检测结果一致.结论 建立了检测大肠杆菌肠毒素基因(estA、estB、elt-Ⅰ和elt-Ⅱ)的多重PCR方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能够满足对细菌培养物的检测要求.