miR-132-3p靶向调控Gab2抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭分子机制的研究

• 作者: 华崇俊 张向明 汪根良 范红娟
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 关键词: miR-132-3p Gab2 胃癌 增殖 迁移 侵袭
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 9-17
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11569/wcjd.v28.i1.9

摘要

背景 miR-132-3p在肿瘤中呈低表达,但miR-132-3p在胃癌(gastric cancer,GC)发生过程中的调控机制尚未阐明.Starbase靶基因预测显示Gab2可能是miR-132-3p的靶基因.本研究假设niR-132-3p可能通过调控Gab2表达从而影响GC细胞增殖、迁移及侵袭.目的 探讨miR-132-3p对ab2表达的调控作用及其对GC细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测正常胃黏膜上皮细胞系GES1与人GC细胞系SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p、Gab2的表达水平;以BGC-823细胞为研究对象,利用脂质体转染法分别将miR-132-3p模拟物(miR-132-3p组)、阴性对照(miR-NC组)、miR-132-3p与pcDNA (miR-132-3p+pcDNA组)、miR-132-3p与pcDNA-Gab2(miR-132-3p+pcDNA-Gab2组)转染至BGC-823细胞,通过qRT-PCR、Western blot验证转染效果.甲基噻唑基四唑检测各组细胞存活率;Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭;Starbase预测Gab2为miR-132-3p的靶基因,分别将野生型Gab2基因3'UTR荧光素酶报告基因载体与miR-132-3p靶序列突变型载体及相应的miRNA转染至BGC-823细胞,双荧光素酶报告实验检测荧光素酶活性;Western blot检测细胞周期蛋白l(CyclinDl)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、P21、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达量.结果 与GES1细胞相比,SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p的表达水平显著降低(P＜0.05),Gab2的表达水平显著升高(P＜0.05);与miR-NC组相比,miR-132-3p组细胞存活率显著降低(P＜0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P＜0.05),CyclinD1、N-cadherin蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),P21、E-cadheri蛋白表达水平显著升高(P＜0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-132-3p能够靶向调控Gab2基因;与miR-132-3p+pcDNA组相比,miR-132-3p+pcDNA-Gab2组细胞存活率显著升高(P＜0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著增多(P＜0.05),CyclinD1、N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),P21、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).结论 miR-132-3p能够通过靶向调控Gab2而抑制GC细胞增殖、迁移及侵袭.