检测猪瘟病毒E0抗体间接ELISA方法的建立及其初步应用

• 作者: 常晓冉 张泽财 涂长春 王新平 王旭 蔡梦露 陈洁 马振乾 龚文杰
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 E0基因 间接ELISA 符合率比较
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 441-449,456
• 页数: 10页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.03.01

摘要

应用RT-PCR技术扩增了猪瘟病毒的E0基因片段,并将其分别克隆到pGEX-4T-1与pET-28a载体,获得了pGEX-4T-1-E0与pET-28a-E0重组表达质粒.以IPTG诱导表达的纯化GST-E0和His-E0重组蛋白为包被抗原,建立检测猪瘟病毒E0抗体的间接ELISA方法.采用方阵滴定法,确定出GST-E0抗原和His-E0抗原的最佳包被量分别为50 ng/孔和100 ng/孔,血清最佳稀释度为160倍.对80份猪瘟阴性血清样品进行了检测与统计学分析,确定出GST-E0和His-E0重组蛋白的间接ELISA方法的临界值分别为0.167和0.176.特异性、敏感性和重复性试验结果表明,本试验建立的基于GST-E0和His-E0蛋白的间接ELISA方法均具有特异、敏感和重复性好等优点.应用GST-E0和His-E0的间接ELISA方法及IDEXX E2抗体检测试剂盒平行检测88份猪血清样品,结果显示基于GST-E0和His-E0的间接ELISA方法与IDEXX试剂盒的符合率分别为78.41％和84.09％.以猪瘟病毒接毒细胞为抗原,应用免疫荧光试验(IFA)对His-E0间接ELISA和IDEXX检测试剂盒检出的阴性与阳性血清样品进行了验证,结果IFA与His-E0间接ELISA方法的符合率为93.18％;IFA与IDEXX试剂盒的符合率为90.91％,表明本试验所建立的基于His-E0的间接ELISA方法用于检测猪瘟抗体优于IDEXX公司检测E2抗体的试剂盒.该方法为鉴别E2亚单位疫苗免疫后的猪群中是否存在野毒感染提供了技术手段.