猪瘟病毒结构蛋白E0抗体间接ELISA检测方法的建立及优化

• 作者: 岳锋 崔芳微 朱艳平 李文明 李鹏 王选年 王金海 郭东光 陈明艳
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 结构蛋白E0 抗体检测 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 151-156
• 页数: 6页
• 分类号: S828
• 字数: 4561字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2019.11.021

摘要

为建立一种经济、可靠的猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,采用间接ELISA(E0-ELISA)方法,以在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的重组蛋白E0为包被原,优化反应条件.结果显示,优化后的E0-ELISA在包被原1.0μg/mL质量浓度下37℃包被1 h效果最佳,最佳封闭条件为5％脱脂奶粉溶液37℃作用2 h,待检血清以1:100稀释后37℃作用60 min效果最佳,二抗以1:5000稀释后37℃孵育45 min效果最佳.当OD450<0.370时,判断为猪血清CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为1.99％ ～7.69％和2.16％ ～9.23％,表明该方法具有良好的稳定性;E0-ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清时结果均为阴性;当CSFV阳性血清稀释至1:640时结果仍为阳性,表明该检测方法具有良好的敏感性;与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒相比,E0-ELISA检测符合率为92.00％,敏感性为97.86％,特异性为78.33％.综上,成功建立一种经济、稳定、特异性好和敏感性高的CSFV血清抗体间接ELISA检测方法.