非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的优化表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

• 作者: 张皓淳
• 来源期刊: 国外畜牧学猪与禽
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 p 54基因 重组蛋白 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2023,（2）
• 所属期刊栏目: 猪业篇目次 试验研究
• 页码范围: 35-42
• 页数: 7页
• 分类号: S816
• 语种: 中文

摘要

为了实现非洲猪瘟病毒 (African swine fever virus，ASFV)p54 基因在大肠杆菌中的高效表达，同时建立以 ASFV-p54 重组蛋白为抗原的间接 ELISA 抗体检测方法，本试验根据GenBank( 序列号：NC_044943.1) 公布的 ASFV p54 的基因序列，设计一对特异性引物，扩增构建pGEX-6P-1-p54 原核表达质粒，在大肠杆菌 BL21(DE3) 菌株中进行复制，经 IPTG 诱导表达，对重组蛋白利用 SDS-PAGE 分析和免疫印迹鉴定正确后，进行表达条件优化，并纯化重组蛋白。随后用ASFV-p54 重组蛋白为包被抗原，通过条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验，建立一种稳定的血清 ASFV 抗体检测方法。结果显示，ASFV p54 基因成功克隆到 pGEX-6P-1 原核表达载体中，得到 pGEX-6P-1-p54 原核表达质粒；转化E. coli 菌株 BL21(DE3) 中，经诱导表达得到重组蛋白，大小为 46 kDa；成功建立测定 ASFV 抗体的间接 ELISA 方法，优化后确定最佳包被浓度为 1.2 µg/mL，待检血清最佳稀释倍数 1∶ 100，最佳封闭液为 1％ BSA，酶标抗体最佳稀释度为 1∶ 4 000，经验证此方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性，可初步应用于 ASFV 抗体的检测。