非洲猪瘟病毒p54抗原C端的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 冯春燕 刘丹丹 吴绍强 张永宁 杜方原 林祥梅 王彩霞
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 p54抗原 多克隆抗体 酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: S852.651
• 字数: 4001字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2019.06.001

摘要

利用大肠埃希菌表达非洲猪瘟病毒核心抗原p54蛋白C末端55个氨基酸的肽段(命名为p54-2),制备了多克隆抗体并进行了纯化,以进一步用于非洲猪瘟ELISA试剂盒的研发.将PCR扩增获得的p54-2目的片段与表达载体pGEX6p-1质粒均经过限制性内切BamH Ⅰ和XhoⅠ双酶切后,构建pGEX6p-1-ASFV-P54-2原核表达质粒.将该质粒转化到大肠埃希菌BL21中,诱导蛋白大量表达,并纯化获得高纯度的蛋白.将纯化的p54-2蛋白免疫小鼠,获得p54-2多克隆抗体并进一步纯化多抗.用ELISA、Westernblot对纯化的多克隆抗体进行效价滴定及特异性鉴定.结果 显示,成功构建了pGEX6p-1-ASFV-P54-2重组质粒,在大肠埃希菌中IPTG诱导下,能够高效表达重组p54-2蛋白.用p54-2蛋白免疫Balb/c小鼠获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶128 000,说明该蛋白有很好的免疫原性.Western blot结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别非洲猪瘟病毒p54胞内区,具有较高反应性和特异性,可以用于ELISA检测方法研究和p54抗原表位的鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林祥梅	中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所	135	890	13.0	26.0
2	吴绍强	中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所	123	615	14.0	21.0
3	张永宁	中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所	27	112	6.0	9.0
4	王彩霞	中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所	28	95	5.0	9.0
5	冯春燕	中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所	23	70	5.0	7.0
6	杜方原	中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所	8	16	3.0	3.0
7	刘丹丹	中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所	8	16	3.0	3.0