非洲猪瘟病毒p30-54融合蛋白基因的构建、表达及其多克隆抗体制备

• 作者: 乔军 孟庆玲 张国武 张星星 才学鹏 李妍 李杰 王晓婷 郭晶
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 p30-54融合蛋白 大肠杆菌表达系统 多克隆抗体 反应原性
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 126-130
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 3513字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.09.021

摘要

为了制备反应原性良好的非洲猪瘟病毒(ASFV)血清学诊断抗原,根据ASFV p30和p54基因序列,通过大肠杆菌密码子优化后分别体外合成全长的p30和p54基因,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将2个基因片段串联,构建p30-54融合基因.将构建的融合基因片段克隆入pET-28a(+)表达载体中,构建原核表达载体pET-p30-54,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达,检测融合蛋白的反应原性,并制备抗该融合蛋白的多克隆抗体.SDS-PAGE检测结果显示,表达的p30-54融合蛋白分子质量为47.1 ku;Western blot分析显示,该融合蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其具有良好的反应原性.将p30-54融合蛋白用Ni-NTA亲和层析柱纯化后免疫小鼠,成功制备了抗ASFV p30-54融合蛋白多克隆抗体.