非洲猪瘟病毒p54蛋白的表达及单抗制备

• 作者: 仇松寅 冯春燕 吴绍强 宋晓晖 张永宁 林祥梅 王彩霞 王淑娟 邓俊花
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 p54蛋白 体外表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 80-84
• 页数: 5页
• 分类号: S855.3
• 字数: 3778字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2016.05.025

摘要

为制备非洲猪瘟病毒p54蛋白的单克隆抗体,本研究扩增p54蛋白的胞外区编码基因,分别克隆到pET30a和pGEX-6p-1中,构建了p54-pET30a和p54-pGEX-6p-1重组质粒;将质粒分别转化到大肠杆菌BL21中,表达C末端带6个His、N端带有GST的p54重组蛋白;利用亲和层析的方法,富集和纯化带His标签的p54蛋白;以带His标签的p54蛋白为抗原,免疫BALB/C小鼠,制备单克隆抗体;以带有GST标签的p54蛋白为抗原,对制备的单抗进行特异性验证.结果显示:大肠杆菌能高效表达带His标签和GST标签的非洲猪瘟p54蛋白;His标签的p54蛋白免疫BALB/C小鼠后,得到了3株单克隆抗体;Western blot结果表明,3株单克隆抗体能与带有GST标签的p54蛋白相互反应.本研究成功制备了p54的单克隆抗体,为进一步开展非洲猪瘟ELISA、Western blot和细胞免疫荧光检测技术的开发研究奠定了基础.