非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的原核表达与反应原性鉴定

• 作者: 任伟杰 吴晓东 孙学强 官丽娟 宫枫举 张志 邵钰 邹艳丽 韩同福 黄保续
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 结构蛋白 p54蛋白 表达
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 63-67
• 页数: 5页
• 分类号: S851.3
• 字数: 3099字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2019.12.014

摘要

p54蛋白为非洲猪瘟病毒(ASFV)的主要结构蛋白之一,参与病毒对靶细胞的吸附与进入.为深入研究p54结构蛋白的抗原性,根据GenBank序列号(MK128995)对应的E183L基因序列,设计1对特异性引物扩增其整个CDS区,并克隆至pET-30a(+)载体,构建了表达p54蛋白的重组质粒pET-30a(+)-p54.用BL21(DE3)转化该质粒,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳,可见重组质粒表达出1条分子量约为20 kDa的特异性条带,且重组表达蛋白以融合表达蛋白形式存在于上清.进一步通过His亲和层析法纯化目的蛋白,用ASFV阳性血清进行蛋白质免疫印迹反应,发现表达的重组p54蛋白能与ASFV阳性血清产生特异性反应,表明p54蛋白表达成功.本研究为ASFV抗体ELISA检测方法的建立奠定了基础.