中国莱姆病螺旋体PD91外膜蛋白A肽段的克隆表达及其免疫保护性的初步研究

• 作者: 侯学霞 张琳 苗广青 郝琴
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 莱姆病螺旋体 外膜蛋白OspA肽段 克隆表达 免疫保护性
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 螺旋体
• 页码范围: 218-224
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn112309-20191016-00330

摘要

目的 克隆并表达中国莱姆病螺旋体基因型代表菌株伽氏疏螺旋体(Borrelia garinii,B.gannii) PD91外膜蛋白A(OspA)的126 ～274 aa肽段,并对其免疫保护性进行初步研究.方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增B.garinii PD91的126～274 aa OspA肽段基因,克隆至原核表达载体pET-30a上,构建pET-30a-OspA-pep重组质粒,转入大肠埃希菌感受态细胞BL21(DE3)中,利用IPTG诱导表达,表达产物用Ni-IDA树脂层析纯化,采用Western blot分析其免疫原性.将不同剂量的重组OspA-pep(rOspA-pep)蛋白(20、30、40、50、60、80、100 μg)免疫新西兰家兔,采用间接免疫荧光法(IFA)检测免疫前后的抗体滴度,选取产生抗体滴度最高的剂量组为最佳剂量组.用最佳剂量组的免疫兔血清进行体外中和试验以检测rOspA-pep蛋白免疫后血清抗体的体外杀菌能力,同时用最佳剂量的rOspA-pep蛋白免疫新西兰家兔,观察其抗体滴度变化.结果 重组质粒pET-30a-OspA-pep构建成功并在宿主菌体内高效表达.Western blot表明rOspA-pep蛋白与B.garinii PD91的多抗有明显的免疫应答.IFA检测结果表明rOspA-pep蛋白免疫后的兔血清IgG抗体滴度明显升高(最高可达1:2480),40μg为rOspA-pep的最佳免疫剂量.体外中和试验结果表明该剂量rOspA-pep蛋白免疫家兔后产生的抗体对106个/ml的B.garinii和阿弗西尼疏螺旋体(Borrelia afielii,B.afzelii)型代表菌株PD91和FP1的中和率达100％,对107个/ml的FP1的中和率为100％,对107个/ml的PD91的中和率为60％.用40 μg rOspA-pep在1d和30 d免疫新西兰家兔2次后,其抗体达到高峰,持续时间为3～4个月,之后抗体滴度逐渐下降.结论 中国莱姆病螺旋体基因型代表菌株B.garinii PD91的126 ～274 aa OspA肽段具有较好的免疫原性,其诱导的抗体有较好的体外中和能力,可作为中国二代亚单位疫苗的候选成分.