禽致病性大肠杆菌O1、O2、O78血清型三重PCR检测方法的建立

• 作者: 任建鸾 姜敏 孙建和 张鹏 戴建君 李德志 汤芳 王娟芳
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 三重PCR 禽致病性大肠杆菌 血清型 特异性 敏感性
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 108-115
• 页数: 8页
• 分类号: S855.1+2
• 字数: 5836字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201811032

摘要

[目的]本试验旨在建立一种能同时检测禽致病性大肠杆菌 O1、 O2 和 O78 3 种血清型的三重 PCR 检测方法.[方法]根据O1、O2 和O78 3种血清型的特异性基因片段设计并合成引物,分别提取O1、O2 和O78血清型禽致病性大肠杆菌的DNA作为模板,优化三重PCR反应条件,进行特异性和敏感性检测,并对临床模拟样品进行检测. [结果]在三重PCR的25 μL反应体系中,dNTP 1.5 μL,MgCl22.5 μL,Taq DNA酶0.6 μL,O1、O2、O78最佳引物加入量分别为0.6、0.2、0.6 μL;最佳退火温度为55.9 ℃.三重PCR的特异性好,3种血清型之间无交叉反应;对146株不同血清型的大肠杆菌进行检测,准确率为99.32%(145/146),用金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和枯草芽胞杆菌进行特异性检测时,没有出现非特异性扩增.三重PCR敏感性高,以单一血清型DNA为模板时,O1 和O2 血清型的DNA最低检测限均为0.1 ng·μL-1,O78血清型的DNA最低检测限为0.02 ng·μL-1;以O1、O2 和O78混合DNA为模板时,最低检测限为0.05 ng·μL-1.对18份临床模拟样品进行检测,准确率为94.4%(17/18). [结论]建立了一种能同时检测O1、O2 和O783种血清型禽致病性大肠杆菌的三重PCR方法,方法特异性好,敏感性高,适用于临床上禽大肠杆菌病的快速检测.