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胰腺癌细胞源性细胞外囊泡的基础研究
胰腺癌细胞源性细胞外囊泡的基础研究
作者:
任远中
刘尚龙
刘恒健
周岩冰
孙钰淇
张丹
徐锦翔
李泽群
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
胰腺癌
细胞外囊泡
超速离心
微小RNA-483-5p
摘要:
目的 分离胰腺癌细胞(PANC-1)和人胰腺导管上皮细胞(HPDE6-C7)细胞培养上清液中的细胞外囊泡,分别比较微小RNA(miRNA,miR)-483-5p在两种细胞及其所分泌的细胞外囊泡中的差异性表达.方法 超速离心法制备去除胎牛血清源性囊泡的完全培养基,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测超速离心前(对照组)与超速离心后(实验组)的完全培养基对细胞增殖作用的差异;用去除血清囊泡的完全培养基培养细胞,超速离心方法提取细胞外囊泡,用二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒和纳米颗粒跟踪分析(NTA)检测细胞外囊泡(EVs)的浓度;用透射电镜、NTA、蛋白质印迹法(Western blot)鉴定其是否符合细胞外囊泡特征.定量即时聚合酶链反应(qPCR)检测miR-483-5p在两组细胞及其分泌的细胞外囊泡中的表达.CCK-8增殖实验和qPCR实验的结果采用t检验分析.结果 CCK-8增殖实验结果显示48 h和72 h后,HPDE6-C7的实验组与对照组之间差异无统计学意义(0.674±0.036比0.671±0.016,=0.315,P48 h >0.05;0.890±0.027比0.925±0.099,=0.581,P72 h >0.05);PANC-1的实验组与对照组之间差异无统计学意义(0.759±0.004比0.761±0.016,=0.249,P48 h >0.05;1.114±0.025比1.145±0.014,t=1.898,P72 h >0.05);透射电镜:细胞外囊泡呈“茶杯托盘”状、NTA结果:98% PANC-1源性细胞外囊泡的直径为130.0 nm、98%HPDE6-C7源性细胞外囊泡的直径为129.7 nm;Western blot实验显示:细胞外囊泡表现为CD63、TSG101阳性,而GM130为阴性;蛋白浓度测定试剂盒和NTA分析测得PANC-1和HPDE6-C7源性的细胞外囊泡浓度分别为:1.5 g/L、1.510 11颗粒/毫升和1.3 g/L、1.610 11颗粒/毫升;与HPDE6-C7比较,PANC-1中miR-483-5p的表达显著增加(2.820±0.180比1.000±0.006,t=-17.539,P<0.01);与HPDE6-C7源性细胞外囊泡比较,PANC-1源性细胞外囊泡中miR-483-5p的表达显著增加(3.503±0.265比1.002±0.084,t=-15.582,P<0.01).结论 超速离心法去除胎牛血清源性囊泡的完全培养基不影响细胞的正常增殖;鉴定结果显示所分离的沉淀符合细胞外囊泡的特征;根据NTA的结果可以判断其应归类于小细胞外囊泡;qPCR结果表明,miR-483-5p在PANC-1和其分泌的细胞外囊泡中均为高表达.
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文献信息
篇名
胰腺癌细胞源性细胞外囊泡的基础研究
来源期刊
中华实验外科杂志
学科
关键词
胰腺癌
细胞外囊泡
超速离心
微小RNA-483-5p
年,卷(期)
2020,(1)
所属期刊栏目
胰腺外科
研究方向
页码范围
12-14
页数
3页
分类号
字数
语种
中文
DOI
10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2020.01.003
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
周岩冰
青岛大学附属医院胃肠外科
161
963
15.0
22.0
2
张丹
17
34
3.0
5.0
3
孙钰淇
2
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0.0
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李泽群
青岛大学附属医院胃肠外科
2
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徐锦翔
3
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6
任远中
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刘尚龙
青岛大学附属医院胃肠外科
3
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1.0
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刘恒健
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研究主题发展历程
节点文献
胰腺癌
细胞外囊泡
超速离心
微小RNA-483-5p
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中华实验外科杂志
主办单位:
中华医学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1001-9030
CN:
42-1213/R
开本:
大16开
出版地:
武汉市东湖路165号
邮发代号:
38-85
创刊时间:
1984
语种:
chi
出版文献量(篇)
17168
总下载数(次)
19
总被引数(次)
69898
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:
the National Natural Science Foundation of China
官方网址:
http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:
青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:
数理科学
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