H4亚型禽流感血凝素单克隆抗体的研制及夹心ELISA的建立

• 作者: 张民秀 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 H4亚型 血凝素 单克隆抗体(mAb)
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 69-74
• 页数: 6页
• 分类号: Q813.2|S852.6|R392-33|R446.61
• 语种: 中文

摘要

目的 制备H4亚型禽流感病毒(AIV)血凝素单克隆抗体(mAb),基于mAb建立H4亚型AIV夹心ELISA检测方法.方法 用灭活H4亚型AIV免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、血凝抑制(HI)试验筛选和亚克隆,得到了一株抗H4亚型AIV mAb(6G4).免疫荧光细胞化学染色和Western blot法验证6G4与H4亚型AIV的反应性,HI试验鉴定6G4特异性、广谱性和稳定性,试剂盒鉴定6G4亚类.以鸡抗H4亚型AIV多克隆抗体作为包被抗体,6G4作为捕获抗体,HRP标记的山羊抗小鼠IgG作为酶标抗体,通过条件优化和一系列验证,建立H4亚型AIV夹心ELISA检测方法.结果 6G4亚类为IgG1,轻链为K链,能稳定分泌抗体,具有良好的反应性、特异性、广谱性和稳定性;基于6G4建立的ELISA特异性强、敏感性高、重复性好,适合大批量检测.结论 成功制备了抗H4亚型AIV的mAb,建立了检测H4亚型AIV的夹心ELISA.