H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/LY1/2017株反向遗传操作系统的建立

• 作者: 丁铲 仇旭升 刘伟 刘炜玮 吴艳涛 孙英杰 孟春春 宋翠萍 廖瑛 张小荣 徐凯 李梦娇 杨彬 谭磊
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 H9N2亚型 反向遗传
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 49-54
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 3854字
• 语种: 中文

摘要

为了构建H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/LY1/2017的反向遗传操作平台,通过RT-PCR技术分别扩增该毒株的8个基因片段,并分别克隆至双向转录表达载体PHW2000中.8个质粒共转染293T/MDCK混合细胞,96 h后将细胞板反复冻融3次收获细胞悬液,将其接种10日龄SPF鸡胚,96 h后收集尿囊液并将拯救毒株命名为rH9N2,测定其HA效价为1:256.rH9N2在HA、MDT、EID50、TCID50以及病毒生长曲线、空斑等方面保持了与亲本毒株一致的生物学特性.本研究成功构建了A/Chicken/Shandong/LY1/2017的感染性克隆,为今后通过基因替换、定点突变技术研究H9N2亚型禽流感病毒致病性的分子机制奠定了基础.