猪附红细胞体α-烯醇化酶基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 关立增 张影 相思宇 薛书江
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪附红细胞体 间接ELISA α-烯醇化酶 原核表达 临床检测
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 诊断和检测技术
• 页码范围: 139-144
• 页数: 6页
• 分类号: S
• 字数: 4804字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201906022

摘要

为建立以猪附红细胞体α-烯醇化酶(ENO)重组蛋白为包被抗原的间接ELISA检测方法.本实验将猪附红细胞体ENO基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-ENO,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,并对其表达产物纯化及western blot鉴定.以ENO重组蛋白为包被抗原,优化反应条件,建立了猪附红细胞体ENO基因的间接ELISA检测方法.结果 显示,经原核表达获得了分子量约为69 ku的重组蛋白,主要以可溶性形式存在;经western blot鉴定,纯化后的蛋白具有良好的反应原性.以纯化的ENO重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA检测方法,优化后的反应条件为:抗原的最适包被浓度为20.5 μg/mL;最佳封闭条件为3％的脱脂乳封闭2h;待检血清最适稀释倍数为1∶80;兔抗猪HRP-IgG最佳稀释倍数为1∶1000;OPD显色时间为15 min;特异性试验结果显示,所建立的间接ELISA检测方法与猪弓形虫、猪大肠杆菌、猪肺炎支原体、猪链球菌等均无交叉反应;该方法检测猪附红细胞体阳性血清的灵敏度为1∶320;批内和批间重复性变异系数均低于5％;应用所建立的间接ELISA检测方法与IFA检测方法平行检测50份采自延边地区某猪场的猪血清样本,两种方法的总符合率为90％.本研究建立的间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可初步应用于猪附红细胞体血清学检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛书江	延边大学农学院	68	124	5.0	7.0
2	张影	延边大学农学院	9	26	3.0	4.0
3	关立增	临沂大学农林科学学院	10	0	0.0	0.0
4	相思宇	延边大学农学院	8	0	0.0	0.0