家畜布鲁氏菌BP26基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘湘涛 吴锦艳 孙继国 尚佑军 张志东 王光祥 臧金凤 陈妍
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 布鲁氏菌 BP26蛋白 间接酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 页码范围: 100-104,111
• 页数: 6页
• 分类号: S513
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2016.0067

摘要

利用原核表达的布鲁氏菌BP26蛋白作为标准抗原蛋白,建立布鲁氏菌病抗体检测方法.本试验从布鲁氏菌S2疫苗株通过PCR扩增获得BP26基因,构建融合表达质粒pET-28a-BP26后并转化BL21宿主菌,IPTG诱导表达,应用Western blot鉴定表达产物,并以纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立布鲁氏菌病抗体ELISA检测方法.结果表明,通过反应条件优化确定抗原的适宜包被浓度为5 μg/mL,血清适宜稀释度为1∶20,二抗的适宜工作浓度为1∶20 000;通过敏感性试验结果表明,当血清稀释至1∶1 280时,仍检测为阳性;通过批间、批内重复性试验,变异系数均小于10％,表明本检测方法具有较高的重复性.用该方法对100份临床样本进行检测,并与试管凝集试验(SAT)进行相符性验证,符合率为94％,为布鲁氏菌病临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段.