布鲁氏菌外膜蛋白BP26细胞毒性作用的研究

• 作者: 唐利燕 孟茹 张俊波 张豫 张辉 李志强 王震 陈创夫 陈瑞花
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 布鲁氏菌 BP26蛋白 bp26缺失株 细胞因子
• 年，卷（期）: 2012,（16）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 3406-3413
• 分类号: S1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.16.021

摘要

[目的]布鲁氏菌外膜蛋白BP26是布鲁氏菌的重要毒力因子,本研究采用bp26基因缺失株和BP26蛋白分别与胚胎滋养层细胞(HPT-8)作用,探讨布鲁氏菌bp26基因的生物学功能.[方法]采用Ni柱亲和层析法纯化BP26蛋白,overlap技术构建布鲁氏菌bp26基因缺失株,用BP26蛋白和bp26基因缺失株分别侵染HPT-8细胞,观察细胞形态变化,ELISA检测上清中的细胞因子.[结果]从布鲁氏菌疫苗株M5-90克隆出bp26基因并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中成功表达,获得纯化的BP26蛋白,经SDS-PAGE验证正确,Western-Blot鉴定具有免疫原性.将目的片段bp26基因的上下臂插入到自杀载体pGEM-7zf中,电转至布鲁氏菌疫苗株M5-90感受态细胞中,成功筛选出了具有遗传稳定性的bp26基因缺失株.用BP26蛋白与bp26基因缺失株分别侵染HPT-8层细胞,BP26蛋白使细胞变形且贴壁不牢,缺失株导致细胞大量脱落溶解,ELISA检测蛋白侵染HPT-8细胞诱导产生的细胞因子IL-6、TNF-α和LDH均高于PBS对照组,差异极显著(P＜0.01),而细胞因子IL-10的分泌下降.缺失株侵染HPT-8细胞诱导产生的细胞因子IL-6、TNF-α均高于M5-90对照组,LDH和IL-10均低于M5-90对照组,差异显著(P＜0.05).[结论]成功获得了布鲁氏菌BP26蛋白和M5-90△bp26缺失株,BP26蛋白可以引起HPT-8细胞的炎性反应,有细胞毒性作用,bp26基因缺失株对HPT-8细胞有损伤作用,bp26基因在布鲁氏菌侵染宿主细胞过程中起重要作用.