G蛋白偶联受体激酶2杂合子敲除小鼠构建及表型鉴定

• 作者: 周伟杰 周正炜 汪庆童 王珍 邰宇 郭派派 陶娟 魏伟
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: G蛋白偶联受体激酶2 CRISPR/Cas9 基因工程小鼠 基因型鉴定
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1035-1041
• 页数: 7页
• 分类号: R394-33
• 字数: 4449字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.07.010

摘要

目的 应用CRISPR/Cas9技术构建G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)杂合敲除(GRK2+/-)小鼠,用于疾病病理机制及药物靶点研究.方法 构建靶向敲除GRK2基因的载体,在体外将先导RNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,在小鼠GRK2基因的第3个外显子上造成基因突变,通过PCR及基因测序测定F0代基因型,成功获得13bp和19bp敲除两种GRK2+/-小鼠.因GRK2纯合子敲除胚胎期死亡,将19bp敲除F0代小鼠与C57BL/6小鼠回交,获得稳定的19bp敲除F1代GRK2+/-小鼠用于扩繁及实验.结果 GRK2+/-小鼠基因型稳定,体重较同龄C57BL/6小鼠低,Western blot检测证实GRK2+/-小鼠心脏、脾脏、胸腺、肝脏、巨噬细胞及肾脏组织中GRK2蛋白的表达均显著降低.结论 该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了GRK2+/-小鼠模型,为进一步研究GRK2在多种脏器、细胞发育中的作用,疾病发病机制及药物作用靶点提供了重要的动物模型.