Seipin敲低大鼠PC12细胞株的构建和对细胞凋亡的影响

• 作者: 任真奎 吕菊 张春林 焦玲 禹文峰 胡玉梅 谢鹏
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞凋亡 帕金森病 PC12细胞 神经变性疾病 Seipin蛋白 基因干扰
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 专题研究1
• 页码范围: 249-254
• 页数: 6页
• 分类号: R742.5|R-332
• 字数: 3613字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2020.03.001

摘要

目的:构建大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的先天性脂肪代谢障碍2型(BSCL2/Seipin)敲低细胞株,探讨Seipin敲低后对细胞凋亡的影响.方法:将PC12细胞分为空白感染组和助感染组(加助感染试剂HitansG),采用不同慢病毒感染复数(MOI)感染细胞进行病毒预感染试验筛选助感染试剂和合适的MOI;依据上述感染条件,用阴性对照病毒和Seipin-shRNA目的病毒感染PC12细胞作为阴性对照组和Seipin敲低组,同时设置正常组(正常PC12细胞),采用蛋白质免疫印迹法检测Seipin蛋白的表达;将阴性对照组与Seipin敲低组细胞用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)细胞凋亡染色法和Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡情况.结果:慢病毒MOI=100时感染效果最强,助感染试剂能增加感染效率;与正常组相比,Seipin敲低组Seipin蛋白表达水平降低(P<0.05);与阴性对照组相比,TUNEL染色结果显示Seipin敲低组发红色荧光的凋亡细胞明显增加,Hoechst染色结果显示Seipin敲低组细胞的细胞核致密浓染或碎块状致密浓染程度明显增多.结论:成功构建大鼠PC12 Seipin敲低细胞,下调Seipin蛋白表达会增加细胞凋亡.