家蚕质型多角体病毒miRNA BmCPV-miR-10的鉴定和功能分析

• 作者: 王永升 林苏 赵泽 徐平 侯成香 高坤 钱荷英 郭锡杰
• 来源期刊: 蚕业科学
• 关键词: 家蚕 质型多角体病毒 miRNA BmCPV-miR-10 靶基因 BmR2D2
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告|Research Papers
• 页码范围: 594-604
• 页数: 11页
• 分类号: S884.5+2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2020.05.009

摘要

家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cypovirus,BmCPV)是家蚕的重要病原之一,也是典型的RNA病毒,为探索其在侵染过程中与家蚕免疫防御系统的互作机制,选择由BmCPV基因组编码的miRNA BmCPV-miR-10进行研究.通过stem-loop qRT-PCR在感染BmCPV的家蚕幼虫中肠中检测到BmCPV-miR-10的表达;靶基因预测发现,家蚕R2D2蛋白基因(BmR2D2)为BmCPV-miR-10的候选靶基因,靶位点位于BmR2D2 mRNA序列的CDS区域.进一步验证miRNA对靶基因的调控作用,分别构建BmCPV-miR-10及其靶基因BmR2D2的慢病毒表达载体,借助包装质粒共转染HEK293T细胞,同时合成了BmCPV-miR-10 mimics转染BmN细胞,qRT-PCR检测结果均证明BmCPV-miR-10能下调靶基因BmR2D2的表达.对感染BmCPV的家蚕幼虫体腔注射BmCPV-miR-10 mimics,分别检测靶基因和BmCPV基因组RNA片段的表达变化,亦证明了BmCPV-miR-10对靶基因BmR2D2的调控作用,并且促进BmCPV基因组的复制.上述结果表明,BmCPV在侵染家蚕的过程中,可能通过编码BmCPV-miR-10下调靶基因BmR2D2的表达,影响宿主RNAi途径在抵抗病毒过程中的作用,从而促进病毒自身的复制.