活性氧-线粒体途径在亚砷酸钠诱导L-02细胞凋亡中的作用

• 作者: 吴长艳 张琦 李晓之 段恬筱 简文 罗鹏 胡倩 胡婷
• 来源期刊: 中华地方病学杂志
• 关键词: 砷剂 活性氧 线粒体 凋亡 L-02细胞
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-9
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-4255.2020.01.005

摘要

目的 探讨亚砷酸钠(NaAsO2)通过活性氧(ROS)蓄积及线粒体损伤诱导人肝细胞L-02凋亡的作用,为砷中毒的作用机制研究提供实验依据.方法 体外培养L-02细胞,分为对照组、NaAsO2组(10 μmol/LNaAsO2)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(5 mmol/L NAC)、NaAsO2+ NAC组(10 μmol/LNaAsO2、5 mmol/L NAC),培养24 h.分别用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法、JC-1染色法、硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞内ROS水平、线粒体膜电位去极化比例和细胞凋亡率;用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、细胞色素C蛋白(Cyt-C)、线粒体DNA编码的细胞色素C氧化酶Ⅳ(COXⅣ)mRNA、蛋白表达水平.结果 各组间细胞内ROS水平(3 857 392.33±44928.39、4 515 288.00±32 660.64、3 670 150.67±101 987.69、4 035 235.67±99 995.30),线粒体膜电位去极化比例(2.16±0.54、7.95±0.52、2.70±0.29、1.01±0.23),细胞总凋亡率(1.45±0.03、4.27±0.17、1.87±0.12、2.52±0.35)比较差异有统计学意义(F=62.62、159.81、112.70,P均＜0.05);各组间Caspase3、Cyt-C、COXⅣmRNA表达水平比较差异有统计学意义(F=9.20、7.33、14.87,P均＜0.05);各组间活化Caspase3(cleaved-Caspase3)、Cyt-C、COXⅣ蛋白表达水平比较差异有统计学意义(F=31.42、8.01、83.30,P均＜0.05).与对照组比较,NaAsO2组L-02细胞内ROS水平、线粒体膜电位去极化比例、细胞总凋亡率明显增高(P均＜0.05);Caspase3、Cyt-C mRNA和cleaved-Caspase3、Cyt-C蛋白表达水平明显增高(P均＜0.05),COXⅣmRNA和蛋白表达水平则显著降低(P均＜ 0.05).与NaAsO2组比较,NaAsO2+ NAC组细胞内ROS水平、线粒体膜电位去极化比例、细胞总凋亡率明显下降(P均＜ 0.05);Caspase3 mRNA和cleaved-Caspase3蛋白表达水平明显降低(P均＜ 0.05),Cyt-C mRNA和蛋白表达水平明显降低(P均＜0.05),COXⅣmRNA和蛋白表达水平明显增高(P均＜ 0.05).结论 NaAsO2可刺激L-02细胞产生大量ROS,诱发线粒体去极化,引发线粒体损伤,使Cyt-C向线粒体外释放增加,激活线粒体凋亡途径Caspase3蛋白酶而引起L-02细胞发生凋亡,这有可能是砷致肝损伤的主要作用机制之一.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗鹏	贵州医科大学公共卫生学院	23	42	4.0	4.0
5	张琦	贵州医科大学公共卫生学院	4	1	1.0	1.0
6	段恬筱	贵州医科大学公共卫生学院	4	1	1.0	1.0
7	李晓之	贵州医科大学公共卫生学院	4	1	1.0	1.0
8	简文	贵州医科大学公共卫生学院	3	0	0.0	0.0
9	吴长艳	贵州医科大学公共卫生学院	3	0	0.0	0.0
10	胡婷	贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室	10	13	2.0	3.0
11	胡倩	贵州医科大学公共卫生学院	1	0	0.0	0.0