去磷酸化抑制CHEK1可破坏S期限制点并诱导CML细胞凋亡

• 作者: 王方 王昕 王亚文
• 来源期刊: 肿瘤
• 关键词: 白血病 髓系 慢性 Bcr/Abl阳性 S期细胞周期检查点 DNA损伤 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究|Basic Research
• 页码范围: 758-766
• 页数: 9页
• 分类号: R733.73
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2020.11.640

摘要

目的:探讨细胞周期检测点激酶1 (checkpoint kinase 1,CHEK1)参与拮抗慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)细胞凋亡的分子机制.方法:通过GEO (Gene Expression Omnibus)数据库内置的R语言程序进行CML细胞的基因表达数据分析,选取差异表达的靶基因.采用实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测8例CML患者外周血中CHEK1mRNA和蛋白的表达水平,并分析其与CML病情进展的关系.用针对CHEK1的抑制剂SCH900776抑制CHEK1磷酸化后,采用FCM法检测K562和Ku812细胞周期及凋亡的变化,并用蛋白质印迹法检测下游相关分子的表达水平变化.结果:通过对GEO数据库中3项CML基因表达数据进行分析,得到共同的差异表达基因共21个,其中12个为表达上调,9个为表达下调;选取CHEK1作为研究对象.CML患者外周血中CHEK1 mRNA和蛋白表达水平均明显高于健康体检者(P值均＜ 0.05),且急变期CHEK1 mRNA表达水平明显高于慢性期(P＜0.05).CHEK1及其磷酸化蛋白的表达水平随病情进展亦有增高的趋势,且在伊马替尼处理后未有明显变化.抑制CHEK1磷酸化可激活caspase-3,并显著诱导K562和Ku812细胞凋亡(P值均＜0.01).抑制CHEK1磷酸化后,S期细胞减少,G2/M期细胞增多,S期相关蛋白细胞周期蛋白E (cyclin E)表达水平下调,而DNA损伤标志物γ-H2XA表达水平升高,同时p53家族成员中p53和p73的表达均明显上调(P值均＜0.05).结论:CHEK1去磷酸化失活可逆转细胞S期阻滞,破环DNA损伤修复,进而导致P73升高,诱导细胞凋亡.