TNF-α诱导的NF-κB慢病毒报告基因系统的构建

• 作者: 周晨辰 张硌 查玉华
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 肿瘤坏死因子α(TNF-α) NF-κB 慢病毒报告基因
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 451-454
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2020.04.013

摘要

目的:构建一种肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的NF-κB慢病毒报告基因系统.方法:以NF-κB信号通路为基础,设计并构建含有NF-κB响应元件和mCherry报告基因序列的表达载体,并进一步建立受NF-κB调控表达mCherry的细胞株,最后使用TNF-α进行刺激验证.结果:质粒经过双酶切鉴定,得到约1500 bp的目的片段,符合预计大小且测序分析正确,表明质粒构建成功;在TNF-α刺激实验中,NF-κB信号通路的刺激物TNF-α作用于构建的NF-κB调控表达mCherry荧光蛋白的细胞株后出现特异性荧光反应,TNF-α诱导组的细胞有较强的mCherry表达,阳性率约为90％,而未加TNF-α组细胞mCherry阳性表达率约为10％.结论:构建了受NF-κB调控稳定表达mCherry的慢病毒报告基因系统,可用于对NF-κB活化效果的检测及筛选,具有普适性的应用价值.