盐酸去氢骆驼蓬碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及自噬的影响

• 作者: 西仁阿依·西热甫 雷秀英 张瑜 伊力亚斯·艾萨 木塔力甫·艾买提 陈倩 冯学召 李飞 米娜
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 盐酸去氢骆驼蓬碱 SH-SY5Y细胞 细胞凋亡 自噬
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 825-831
• 页数: 7页
• 分类号: R964
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2020.11.004

摘要

目的 探讨盐酸去氢骆驼蓬碱(HMH)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及自噬的影响.方法 ①SH-SY5Y细胞分别加入HMH 10,20,40,80和160μmol·L-1或DMSO(细胞对照组)孵育24 h,通过MTT实验检测SH-SY5Y细胞存活率;Hoechst33342/PI染色法观察细胞凋亡;Western印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、胱天蛋白酶3、活化的胱天蛋白酶3及自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)和P62的表达.②SH-SY5Y细胞分别加入HMH(2和4μmol·L-1)或DMSO孵育14 d,检测SH-SY5Y细胞克隆形成率.③HMH 40μmol·L-1单独或与3-甲基腺嘌呤(3-MA)5 mmol·L-1同时加入SH-SY5Y细胞,分别培养4或24 h后,Western印迹法检测LC3B-Ⅱ蛋白的表达.④将SH-SY5Y细胞分别加入HMH 40μmol·L-1或溶剂孵育24 h后,Western印迹法检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p-mTOR的表达.结果 ①与细胞对照组相比,药物作用24 h后HMH 20～160μmol·L-1组细胞存活率降低(P<0.01),凋亡细胞增多,LC3B-Ⅱ蛋白的相对表达量及Bax/Bcl-2的比值增加(P<0.05,P<0.01),P62蛋白的相对表达量减少(P<0.01).HMH 40～160μmol·L-1组活化的胱天蛋白酶3/胱天蛋白酶3的比值增加(P<0.05).②与细胞对照组相比,药物作用14 d后,HMH 2和4μmol·L-1组细胞克隆形成率降低(P<0.01).③HMH与3-MA同时孵育24 h后,细胞LC3B-Ⅱ的相对表达量比HMH 40μmol·L-1单独处理组降低(P<0.05).④与细胞对照组相比,HMH 40μmol·L-1组Akt和mTOR的磷酸化水平均降低(P<0.05).结论 HMH通过抑制Akt/mTOR通路抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖,诱导凋亡与自噬.