小鼠原代肝细胞糖异生研究模型的建立

• 作者: 李辉龙 万禄明 杨欢 彭雨蒙 王化鹏 韦猛 莫运海 徐艺心 魏从文 钟辉 吴飞翔
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠原代肝细胞分离 糖异生细胞模型 胰高血糖素
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 704-709,719
• 页数: 7页
• 分类号: Q813.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2020.06.013

摘要

目的:分离小鼠原代肝细胞并建立体外糖异生研究模型.方法:利用胶原酶两步灌注法分离并提纯小鼠原代肝细胞,彻底清除细胞内糖原,以丙酮酸和乳酸作为糖异生原料,观察胰高血糖素作用下,小鼠原代肝细胞的葡萄糖产出水平、糖代谢关键酶基因表达水平,以及cAMP-PKA信号通路的激活情况,建立小鼠原代肝细胞糖异生研究模型.结果:分离的小鼠原代肝细胞具有典型的肝细胞形态,可见双核,细胞相互接触,排列成肝索样结构.在胰高血糖素作用下,小鼠原代肝细胞糖异生葡萄糖产出量显著增加,小鼠原代肝细胞糖异生关键酶基因表达明显上调,且胰高血糖素能够促进细胞cAMP积累进而诱导PKA激活.结论:小鼠原代肝细胞分离后状态良好,能够在葡萄糖产出水平及细胞内信号通路激活上高效模拟哺乳动物机体糖异生代谢,是一项体外研究糖异生代谢的有效模型.