基于mtCOI基因的三种短体线虫多重PCR检测

• 作者: 于家荣 李红梅 王亚东 王暄 秦鑫
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 多重PCR 线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因(mtCOI) 短体线虫 特异性
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 562-570
• 页数: 9页
• 分类号: S432.4+5
• 字数: 5952字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.03.018

摘要

短体线虫(Pratylenchus spp.)是严重破坏世界农业生产的一类植物寄生线虫,建立针对该类线虫的快速检测方法,对根腐线虫病的综合防控至关重要.本研究基于线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(mitochondrial cytochrome oxidaseⅠ,mtCOI)基因序列,分别设计了咖啡短体线虫(P.coffeae)、落选短体线虫(P.neglectus)和斯克里布纳短体线虫(P.scribneri)的特异性上游引物Pc-m193-F、Pn-m280-F和Ps-m66-F以及三者通用的下游引物Pcns-m-R,扩增产物预期大小分别为225、137和351 bp,检测灵敏度分别为1/1000、1/10000和1/100单条成虫;经过不同引物配比及退火温度等反应条件优化,当引物Pc-m193-F、Pn-m280-F、Ps-m66-F、Pcns-m-R浓度分别为0.4、0.4、0.8、1.2μmol/L,退火温度为54℃时,上述引物组合在1个PCR反应体系中能够同时检测出3种靶标线虫.运用该多重PCR体系对18个短体线虫样品进行检测,结果与已知鉴定结果相一致.本研究建立的多重PCR体系可快速检测咖啡短体线虫、落选短体线虫和斯克里布纳短体线虫单一或复合侵染样品,可为我国小麦(Triticum aestivum)根腐线虫病的诊断与综合治理提供技术支持.