多重PCR鉴定三种颚口线虫方法的建立

• 作者: 张永年 张鸿满 李健 李树清 李雯雯 王巧全 陈志飞 陈韶红 黄维义
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 棘颚口线虫 日本颚口线虫 杜氏颚口线虫 多重PCR 虫种鉴定
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 页码范围: 38-45
• 页数: 8页
• 分类号: S852.731
• 字数: 4529字
• 语种: 中文

摘要

为了建立快速、灵敏、可靠的鉴别颚口线虫虫种的方法，根据GenBank中发表的棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫ITS-2序列，设计了3对特异引物，建立了这3种颚口线虫的单一PCR和多重PCR检测方法，并分别对单一PCR和多重PCR方法的特异性和敏感性进行了鉴定。结果显示单一PCR和多重PCR均能特异扩增出棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫，其片段大小分别为282、358、183 bp，单一PCR对棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫虫体DNA最小检出量分别为0.2、0.01、0.01 ng/μL。对宫脂线虫、异尖线虫、棘口吸虫以及迭宫绦虫均不能进行扩增。用建立的多重PCR方法对菲律宾、印度尼西亚、黑龙江颚口线虫等12条颚口线虫DNA模板进行扩增，经鉴定菲律宾与印度尼西亚的颚口线虫为棘颚口线虫，黑龙江的颚口线虫为日本颚口线虫。鉴定结果与原虫体样本的形态鉴定和测序分析结果一致。研究显示建立的多重PCR方法具有很强的特异性和较高的敏感性，可用于棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫虫种的鉴定和流行病学调查。