c-myc基因沉默对PM2.5染毒L02肝细胞癌基因和凋亡基因表达的影响

• 作者: 徐新云 曾明 李柏茹 李闰冰 王冰玉 秦双建 肖芳 蔡颖 郑凯
• 来源期刊: 中华劳动卫生职业病杂志
• 关键词: 颗粒物 细颗粒物 肝细胞 基因沉默 癌基因 凋亡基因
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 657-663
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn121094-20191030-00507

摘要

目的 构建c-myc基因沉默肝细胞株,研究c-myc基因沉默对PM2.5染毒L02肝细胞凋亡基因和癌基因表达的影响.方法 根据GenBank提供的c-myc基因mRNA序列,设计合成3条干扰序列,将重组慢病毒载体转染L02肝细胞.利用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和蛋白免疫印迹法(Westernblotting)对c-myc基因沉默效果进行鉴定.用L02肝细胞、c-myc基因沉默细胞作为试验对象,用浓度为50 μg/ml的PM2.5水溶物和10 μmol/L阳性对照Cr6+染毒24h即PM2.5组、Cr6+组,同时设立空白对照组;荧光定量PCR检测癌基因(c-myc、c-fos、k-ras、p53)和凋亡基因[半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9]的mRNA相对表达水平;Western blotting检测癌基因和凋亡基因的蛋白质表达水平.结果 与正常L02肝细胞比较,c-myc基因沉默细胞的c-myc基因表达明显受到抑制,其mRNA表达量下降81％.c-myc蛋白表达下降70％(P＜0.01).与正常L02肝细胞比较,PM2.5水溶物染毒组c-myc、c-fos、k-ras表达水平分别下降84.1％、45.4％、54.6％,p53表达升高192.9％、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达分别下降24.4％、36.1％、60.9％ (P＜0.05).Cr6+阳性对照组c-myc、c-fos、k-ras表达分别下降72.1％、82.2％、54.0％,p53表达升高250.0％,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达分别下降34.6％、36.0％、68.9％(P＜0.05).与正常L02肝细胞比较,PM2.5染毒组c-myc和c-fos蛋白表达量升高,p53蛋白表达量下降,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达升高(P＜0.05);与c-myc基因沉默细胞比较,PM2.5染毒组c-myc和c-fos蛋白表达量下降,p53蛋白表达量上升(P＜0.05).结论 PM2.5可引起L02肝细胞癌基因和凋亡基因表达水平明显升高,c-myc基因沉默在一定程度上能抑制PM2.5对凋亡基因和癌基因的激活作用.