不同调控元件及组合对烟草外源蛋白瞬时表达的效果分析

• 作者: 刘文浩 刘琬琳 王瑞丰 许杰
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 植物瞬时表达 调控元件 烟草 转录调控 双荧光素酶
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 62-71
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-1226

摘要

植物瞬时表达是一种高效快速获得外源基因表达的方法,该系统主要应用于蛋白互作研究、调控元件功能分析、蛋白亚细胞定位和蛋白制剂合成等方面.为了进一步提高外源基因在瞬时表达体系中稳定表达效果,本研究对瞬时表达载体的多种作用元件及转化条件进行优化.首先,我们在目前最常用的双元表达载体pCambia1300骨架上,分别添加可增强特异性转录和稳定蛋白表达的新的调控元件,构建pREU-EF、pREUR-EF和pREUR-p24-EF重组表达载体,并且通过定性和定量方法分析不同元件组合、不同菌液浓度对报告基因eGFP表达的影响.激光共聚焦显微镜观察结果证明3个重组载体可在烟草叶片的细胞膜、细胞质和细胞核中快速表达报告基因;定量PCR分析表明3个重组载体中报告基因在转录表达水平上分别比原pCambia1301-eGFP载体提高了4倍、20倍和28倍;蛋白水平分析表明烟草叶片转化48 h后,pREUR-EF外源蛋白表达量明显高于pREU-EF;并且当菌液注射液浓度OD600=0.4左右时,外源蛋白的表达效率最高.此外,我们还进一步把改造后的瞬时表达重组载体运用到双荧光素酶(Dual-Luciferase)报告系统中,实验证明改造后的瞬时表达重组载体可以更加快捷和有效地用于转录调控分析.因此,烟草瞬时表达载体中作用元件增加和优化组合,可以有效地提高外源蛋白的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许杰	上海交通大学生命科学技术学院	14	19	2.0	4.0
2	刘文浩	上海交通大学生命科学技术学院	2	0	0.0	0.0
3	刘琬琳	上海交通大学生命科学技术学院	2	0	0.0	0.0
4	王瑞丰	上海交通大学生命科学技术学院	1	0	0.0	0.0