模板质量对RT-PCR结果的影响及分析

• 作者: 丁旭 张嘉琪 徐连秀 狄文慧 聂文营 解宇浩 郝峰 郭佳琦
• 来源期刊: 吉林医药学院学报
• 关键词: RT-PCR 模板 蛋白质
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 340-342
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 探究模板质量对RT-PCR结果的影响及分析其影响因素.方法 从大鼠甲状腺滤泡上皮细胞中提取总RNA进行逆转录,产物进行PCR、NanoDrop检测其质量.选用不同浓度PCR产物及加入不同浓度标准蛋白( BSA)进行PCR,并进行琼脂糖凝胶电泳.凝胶成像仪分析不同浓度蛋白质对PCR终产物量的影响, Image J软件对PCR产物定量分析.结果 模板质量低时,模板量与PCR产物量成反比,且选取质量不佳的模板会产生非特异性条带;模板质量高时,模板量与PCR产物量成正比,且未见非特异性条带;模板受杂质污染(如蛋白质污染)时,在模板量相同情况下,蛋白浓度越高,PCR产物的量越低.结论 模板质量严重影响RT-PCR结果,模板质量低时,应减少模板的量.