噬菌体展示技术筛选结核分枝杆菌PPE17蛋白的特异性结合肽

• 作者: 任易 周菁 陈丽峰 陈军
• 来源期刊: 公共卫生与预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 PPE17蛋白 噬菌体展示技术 结合肽
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-20
• 页数: 3页
• 分类号: R183.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-2483.2020.05.005

摘要

目的 运用噬菌体展示技术,对结核分枝杆菌PPE17蛋白特异性结合肽进行了初步筛选.方法 从结核分枝杆菌基因组中扩增PPE17基因,克隆到pET28a中,在大肠杆菌BL21中表达,Ni2+柱纯化,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定.将纯化的PPE17蛋白包被到ELISA板中,用噬菌体7肽库进行筛选,经4轮淘选后,随机选取噬菌斑进行测序,并用DNAMAN对阳性克隆所编码的多肽氨基酸序列进行分析比较.结果 成功构建并表达了PPE17抗原,获得分子量约为37 kD的可溶性蛋白.从第4轮的洗脱物中,随机挑选20个噬菌斑.测序结果可翻译成8种多肽分子,其中重复6次的多肽序列为LKWGHVY.结论 通过噬菌体展示技术筛选到PPE17蛋白的特异性结合肽,有望成为鉴定该抗原的小分子诊断制剂.