Koutango病毒TaqMan反转录聚合酶链式反应方法的建立

• 作者: 付士红 何英 刘文婧 李樊 梁国栋 殷启凯 王环宇 聂凯 许松涛 陈晓菁 雷雯雯
• 来源期刊: 疾病监测
• 学科: 医学
• 关键词: Koutango病毒 TaqMan反转录聚合酶链式反应 分子检测
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 虫媒病毒监测专题
• 页码范围: 197-201
• 页数: 5页
• 分类号: R373.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2020.03.005

摘要

目的 建立Koutango病毒(KOUTV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法.方法 从GenBank中下载KOUTV基因序列,进行多序列比对分析,针对NS5基因中的高保守序列片段设计KOUTV的特异引物与探针,用4科9种病毒进行检测方法特异性验证,通过平行重复实验验证检测方法稳定性,利用体外转录的RNA标准品建立了KOUTV的NS5基因拷贝数的绝对定量分析模型.结果 引物与探针工作特异性良好,同一样品重复检测循环阈值(Ct)的变异系数均小于1.5％,定量分析模型灵敏度达到1.0×102拷贝/反应.通过本研究建立的快速检测方法对新疆采集的112批,6 328只蚊虫进行了测定,结果均为阴性.结论 成功建立了KOUTV的高特异性、高敏感性的TaqMan RT-PCR检测方法,可应用于实验室和临床诊断.