SIRT6调节CDK4去乙酰化增加A549细胞放射敏感性的实验研究

• 作者: 张建文 张彪 李林 熊良庚 谭彬昕 雷秀兵
• 来源期刊: 临床肿瘤学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 非小细胞肺癌 沉默信息调节蛋白6(SIRT6) 细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4) 放射敏感性
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 882-887
• 页数: 6页
• 分类号: R730.55|R734.2
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨上调沉默信息调节蛋白6(SIRT6)表达对A549细胞放射敏感性的影响以及可能作用机制.方法 体外构建SIRT6过表达或细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)过表达重组慢病毒载体,分别转染A549细胞.将A549细胞分为空白对照组、阴性对照组、SIRT6过表达组、SIRT6/CDK4过表达组.MTT法和流式细胞术检测不同放射剂量(2、4、6、8、10 Gy)照射对A549细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响,并计算增敏比(SER).采用Western blotting法和免疫共沉淀法检测各组细胞CDK4、G1/S?特异性周期蛋白?D1(CCND1)抗体、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)蛋白表达量以及CDK4乙酰化水平.结果 经照射后,SIRT6过表达组细胞增殖抑制率高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),SIRT6过表达组SER为1.265;SIRT6过表达组细胞凋亡率为(31.15±3.69)％,G1期细胞比例为(49.35±4.27)％,均高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).与空白对照组比较,SIRT6过表达组A549细胞CDK4(0.29±0.03)、CCND1(0.14±0.01)、PKM2(0.07±0.01)、GLUT1(0.20±0.03)蛋白相对表达量降低;而与SIRT6过表达组比较,SIRT6/CDK4过表达组A549细胞CDK4(1.20±0.11)、CCND1(0.37±0.01)、PKM2(0.27±0.02)、GLUT1(0.87±0.08)蛋白相对表达量升高(P<0.05).经coIP实验,CDK4蛋白和SIRT6蛋白可共同沉淀.SIRT6过表达组CDK4乙酰化程度(Ac?CDK4:0.41±0.07)较空白对照组(1.35±0.22)和阴性对照组(1.30±0.24)降低(P<0.05).结论 上调SIRT6表达可诱导CDK4蛋白赖氨酸脱乙酰化,导致细胞G1期阻滞,并降低糖酵解过程相关酶类的表达,抑制肿瘤细胞增殖活力,进而增加A549细胞对放射线的敏感性.