ALG5对猪流感病毒复制的影响

• 作者: 周红波 操继跃 杨帅科 蒋美君 赵亚馨 邹佳辉
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: ALG5 CRISPR/Cas9 基因敲除 猪流感病毒
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1719-1727
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 5592字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.07.024

摘要

在实验室前期利用猪肾细胞(PK-15)CRISPR/Cas9全基因组敲除文库(PK-15-GeCKO)筛选到猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)复制相关的宿主因子磷酸十二烷基磷酸酯-葡萄糖基转移酶(ALG5)的前提下,深入研究ALG5与SIV复制的关系.本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了包含ALG5基因向导RNA(gRNA)的质粒LentiGuide-puro-ALG5,并通过慢病毒包装感染稳定表达Cas9蛋白的新生猪气管上皮(NPTr)细胞系,采用有限稀释法筛选ALG5基因敲除的单克隆细胞株,通过靶基因组测序及Western blot验证了ALG5基因在NPTr细胞上的敲除水平,通过CCK-8试验验证基因敲除细胞和野生型细胞的细胞活性.结合TCID50和Western blot试验检测了ALG5敲除和过表达对SIV复制的影响.同时,检测了SIV感染NPTr细胞后内源性ALG5蛋白表达量的变化.最后检测了ALG5敲除对猪流感毒株F26复制的影响.结果显示:获得了ALG5敲除的NPTr单克隆细胞系(ΔALG5),ALG5基因敲除细胞与野生型细胞的细胞活性无显著差异.ALG5基因敲除显著抑制SIV的增殖,过表达促进SIV的增殖.在病毒感染条件下,随着病毒的增殖,ALG5的蛋白表达量上调.ALG5基因敲除后,也可以抑制猪流感毒株F26的复制,无毒株特异性.本研究表明,ALG5是影响猪流感病毒复制过程的一个重要宿主因子,为研究猪流感病毒的复制和致病机制奠定了基础.