猪传染性胃肠炎病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立

• 作者: 吴小萍 周恩民 张欣 朱海鹏 焦韵洁 穆杨 贾存瑜 赵毅
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪传染性胃肠炎病毒 环介导等温扩增 可视化 检测方法
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1272-1279,1285
• 页数: 9页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.07.02

摘要

通过对比猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)主要流行毒株的M基因序列,选择其高度保守的区域设计LAMP引物,以羟基萘酚蓝(HNB)为指示剂,建立了1种快速检测TGEV的可视化环介导等温扩增方法.结果 显示,采用建立的方法在恒温水浴锅中约1h即可完成检测;用该方法检测猪流行性腹泻病毒,猪轮状病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒,猪细小病毒,猪圆环病毒,均不发生交叉反应;以pET-21b-M质粒为模板评价所建立方法的敏感性,最低检测限为3.7×103个拷贝,比普通PCR方法高2个数量级;在反应前向反应体系中加入HNB,反应结束后阳性反应管颜色从紫罗兰色变为天蓝色,阴性反应管颜色无变化,且阴阳性管颜色差异明显.用建立的方法对收集的42份临床腹泻样品进行检测,共检测到21份样品阳性.为快速检测TGEV提供方法.