RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗

• 作者: 刘加波 庞耀珊 曾婷婷 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲 黄秀琴 黄莉
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 猪瘟病毒(CSFV) 猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV) RT-LAMP 浊度 特异性 敏感度
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧?兽医?水产?蚕桑
• 页码范围: 338-343
• 页数: 6页
• 分类号: S852.651
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/jissn.2095-1191.2015.2.338

摘要

【目的】建立可视化检测猪瘟病毒（CSFV）及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株（HCLV）的逆转录环介导等温扩增技术（RT-LAMP），为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据GenBank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列，设计两套针对CSFV和HCLV的特异性引物，并优化RT-LAMP反应条件，同时用LA-320C浊度仪实时监测其浊度变化。【结果】优化的RT-LAMP仅需在63℃水浴锅中反应50 min即可完成检测，且能通过肉眼观察反应液的颜色变化直接判定结果；所有CSFV样本的检测结果均为阳性（翠绿色），其他非CSFV样本的检测结果均为阴性（桔红色），且能特异性鉴别HCLV毒株，与实时浊度监测结果一致。该方法对CSFV和HCLV的最小检测限分别是100和101 copies，敏感度分别是常规RT-PCR的100倍和10倍。【结论】建立的RT-LAMP特异性强、灵敏度高、方法简便，尤其适合基层进行CSFV感染的快速检测及特异性鉴别HCLV，对有效防控CSF具有重要意义。