甲型H1N1流感病毒感染犬肾细胞外泌体的分离与鉴定

• 作者: 刘康 江梦圆 葛以跃 朱小娟 陈银 赵康辰 吴涛 王祥喜 庞正 崔仑标 朱凤才
• 来源期刊: 江苏预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 甲型流感病毒 犬肾细胞 外泌体 分离鉴定
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 599-602
• 页数: 4页
• 分类号: R373.1+3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13668/j.issn.1006-9070.2020.06.001

摘要

目的 分离与鉴定甲型H1N1流感病毒感染犬肾(MDCK)细胞外泌体.方法 以甲型H1N1流感病毒感染MDCK细胞,采用间接免疫荧光法确定最佳外泌体收集时间;通过沉淀法和免疫磁珠法相结合提取分离外泌体,并采用透射电镜观察形态并检测粒径,以Western blot鉴定标志蛋白.结果 病毒接种24 h后,＞90％ MDCK细胞被流感病毒感染,95％细胞保持活性,选取感染24 h作为外泌体收集时间点;透射电镜检测发现,流感病毒-外泌体呈圆形囊泡状,直径约30?150 nm;粒径检测结果显示,外泌体粒径主峰85.1 nm,平均111.3 nm,分布较均匀;Western blot表明流感病毒-外泌体表达标志性蛋白为CD63和TSG101.结论 成功从甲型H1N1流感病毒感染的MDCK细胞分离出外泌体,鉴定发现纯度较高,为进一步研究外泌体在甲型流感病毒感染过程中的作用奠定了基础.