不同RNA提取及反转录方法对环状RNA聚合酶链反应的影响

• 作者: 王建星 聂子元 董金辉 贾新菊
• 来源期刊: 河北医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 核糖核苷酸类 聚合酶链反应 核苷酸扩增技术
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 431-435
• 页数: 5页
• 分类号: R342.4
• 字数: 4278字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3205.2020.04.014

摘要

目的 比较不同总RNA提取方法及不同反转录引物对喉鳞状细胞癌细胞株Hep2细胞环状RAN扩增的影响,进一步为环状RNA鉴定与扩增提供可靠的实验方法.方法 使用Trizol抽提法和miRNeasy Mini试剂盒提取Hep2细胞中的总RNA;Nanodrop 2000对总RNA进行定量及纯度测定;使用随机引物和通用引物分别对总RNA进步反转录;实时定量聚合酶链反应检测Hep2细胞中环状RNA-circHIPK3及circFLNA的表达.结果Trizol抽提法提取的RNA浓度和RNA总量高于miRNeasy Mini试剂盒提取的RNA总浓度结果(P<0.01),但应用miRNeasy Mini试剂盒提取的RNA纯度要高于Trizol抽提法(P<0.05),应用随机引物反转录,能扩增出circHIPK3和circFLNA,而利用通用引物进行反转录,circHIPK3及circFLNA不能被扩增;另外,利用miRNeasy Mini试剂盒法提取总RNA后所扩增出circHIPK3及circFLNA的相对表达量明显高于Trizol抽提法(P<0.01).结论 miRNeasy Mini试剂盒提取总 RNA纯度更高,更有利于环状 RNA的扩增,利用随机引物进行反转录而非通用引物,可顺利扩增出环状 RNA.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾新菊	河北医科大学第一医院内分泌科	11	61	3.0	7.0
2	董金辉	河北医科大学第二医院耳鼻喉一科	9	40	3.0	6.0
3	王建星	河北医科大学第二医院耳鼻喉一科	10	41	3.0	6.0