动物RNA病毒检测关键试剂—反转录酶(M-MLV Rtase)的制备

• 作者: 刘文晓 刘环 张伟 张鹤晓 牛建蕊 蒲静 高志强
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: M-MLV RTase 表达 纯化 RT-PCR
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 实验观察
• 页码范围: 26-28,后插2
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65+93
• 语种: 中文

摘要

反转录酶是动物RNA病毒分子诊断用到的关键试剂之一.为获得纯度高、活性高、制备简单经济的M-MLVRTase,本试验将M-MLV RTase的基因序列进行密码子优化,合成并构建表达载体.将表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta宿主菌种,经IPTG诱导后实现M-MLV RTase的可溶性表达.利用Ni2+柱亲和层析纯化载有6xHis标记的重组M-MLV RTase,对重组酶进行Western Blotting试验,鉴定为M-MLV RTase.通过对动物流感病毒RNA的普通RT-PCR和荧光RT-PCR检测来评价重组酶的活性并估测其活性单位.将活性单位相当的重组酶和商品酶进行比较,结果显示,制备的重组酶活性高,对不同浓度病毒RNA的检测结果与商品酶相当.研制的M-MLV RTase可以用于动物RNA病毒的分子诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘环		51	203	7.0	11.0
2	蒲静		34	111	6.0	8.0
3	张伟		48	119	7.0	8.0
4	高志强		48	143	7.0	9.0
5	张鹤晓		43	280	9.0	15.0
6	牛建蕊		3	2	1.0	1.0
7	刘文晓		2	1	1.0	1.0